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液相色譜柱流動(dòng)相的配制和流速的選擇

更新時(shí)間:2021-07-05      點(diǎn)擊次數(shù):9095
液相色譜柱流動(dòng)相的配制和流速的選擇
 
1、流動(dòng)相的配制
 
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
 
(1) 流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。
(2) 流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)
(3) 流動(dòng)相的黏度要盡量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長(zhǎng)泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。
(4) 流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器,最好使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
(5) 流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
(6) 在流動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
 
2、流動(dòng)相流速的選擇
 
因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
 
當(dāng)選用最佳流速時(shí),分析時(shí)間可能延長(zhǎng)。可采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí),可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
 
注意:
 
(1) 含水流動(dòng)相最好在實(shí)驗(yàn)前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過夜。最好加入*,防止細(xì)菌生長(zhǎng)。
(2) 流動(dòng)相要求使用0.45 μm或0.22μm濾膜過濾,除去微粒雜質(zhì)。
(3) 使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相,使用合適的流動(dòng)相可延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,提高柱性能。

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